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關(guān)于微生物菌種的冷凍干燥保藏轉(zhuǎn)接技術(shù)

更新日期: 2025-01-09
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冷凍干燥保藏轉(zhuǎn)接技術(shù):
建議用下列方法恢復(fù)培養(yǎng)冷凍干燥保藏的菌種。
1、安瓶管開封
用浸過(guò)70%酒精的脫脂棉擦凈安瓿管。
用火焰將安瓿管頂端加熱。
滴無(wú)菌水至加熱的安瓿管頂端使玻璃開裂。
用挫刀或鑷子敲下已開裂的安瓿管的頂端。
2、菌株恢復(fù)培養(yǎng)
用無(wú)菌吸管,吸取0.3-0.5ml適宜的液體培養(yǎng)基,滴人安瓿管內(nèi),輕輕振蕩,使凍于菌體溶解呈懸浮狀。
取0.1-0.2ml菌體懸浮液,移植于適宜的瓊脂斜面/平板培養(yǎng)基上,剩余的菌液,注入適宜的液體培養(yǎng)基內(nèi),然后在建議的溫度下培養(yǎng)。
3、注意事項(xiàng)
菌種活化前,請(qǐng)將安瓿管保存在6一10℃的環(huán)境下。
厭氧菌的培養(yǎng),如無(wú)特別說(shuō)明,自開封至接種完成,均需以無(wú)氧氣體充填,以保持厭氧狀態(tài)。
某些菌種經(jīng)過(guò)冷凍干燥保存后,延遲期較長(zhǎng),需連續(xù)兩次繼代培養(yǎng)才能正常生長(zhǎng),此時(shí)請(qǐng)將步驟二重復(fù)一次。
轉(zhuǎn)接方法:
真菌轉(zhuǎn)接需使用的接種工具為接種鉤、鏟,其樣式大小。制造的金屬可用鉑絲或鎳絲,也可使用電爐絲,原則是軟硬度適當(dāng),能經(jīng)受反復(fù)火焰燒紅。接種真菌的接種鉤、鏟,其絲的直徑以1毫米比較適合。步驟:右手執(zhí)針(鏟、鉤等),左手執(zhí)管,燒針滅菌,拔塞燒口,挑菌移植,燒口塞管,燒針滅菌等。
右手執(zhí)接種鉤、鏟,使前端細(xì)絲的部位全部在火焰上燒紅殺菌,左手執(zhí)斜面試管,試管口在拔塞前快速通過(guò)火焰,不要使試管口過(guò)熱;
接種鉤、鏟前端細(xì)絲的部位全部燒紅后插入70%無(wú)菌酒精里,拿出再燒紅,空氣中自然冷卻或放入70%無(wú)菌酒精瓶?jī)?nèi)冷卻,再將接種鉤、鏟前端細(xì)絲的部位快速通過(guò)火焰除去酒精;
用接種接種鉤、鏟挑取菌塊移植到新的斜面培養(yǎng)基上(斜面試管管口滅菌)后;
試管口和塞子快速通過(guò)火焰滅菌,不要使試管口過(guò)熱或使棉塞著火;
斜面試管口塞緊硅膠塞或棉塞,將接種鉤、鏟接觸真菌的部位燒紅后放入70%無(wú)菌酒精瓶中;
接種后的試管放25℃(無(wú)特殊溫度要求的真菌)培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
 
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